变态反应性脑脊髓炎（AE）小鼠模型_江苏艾菱菲生物科技有限公司

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变态反应性脑脊髓炎（AE）小鼠模型

实验性变态反应性脑脊髓炎（EAE）是一种以特异性致敏的CD4+T细胞介导为主的，以中枢神经系统内小血管周围出现单个核细胞浸润及髓鞘脱失为特征的自身免疫性疾病，是人类多发性硬化（MS）的理想动物模型，在临床神经免疫学的研究中具有重要意义。

模式动物品系 选择EAE模型敏感动物，例如：SJL/J 、 B10PL 、 PL/J小鼠、Lewis大鼠、豚鼠、家兔等

实验分组 实验分六组：正常对照组、模型组、阳性药组、受试药组三个剂量组

实验周期 3-5周

建模方法 抗原和抗原乳剂

应用 n/a

观测数据指标 Knono等级标准评定、抗原特异性T细胞增殖试验、T淋巴细胞分离和T细胞CD表型分析、脑脊髓组织病理和免疫组

化分析等

建模流程：

主要分为主动诱导法和被动诱导法。

主动诱导法

（1）制备抗原，并与佐剂混合制成抗原乳剂。
（2）大鼠于足下（脚垫）处注射抗原乳剂，小鼠于脊柱背侧皮下注射抗原乳剂。48H后再注射百日咳毒素。
（3）注射当天为第0天，每日统计动物体重数据、动物疾病临床神经功能分级（Knono评分标准），直至免疫后30天。
（4）分离提取发病动物淋巴结细胞与MBP共培养，做抗原特异性T细胞增殖试验。对T淋巴细胞分离和T细胞CD表型分析。

（5）动物脑脊髓组织病理和免疫组化分析发病后分离脑组织淋巴细胞FACS，可见到PKH2-GL标记细胞，而肝脾组织中极少发现PKH2-GL阳性细胞，表明具有器官特异性。

被动转移实验：

构建方法：分离EAE抗原特异反应性T细胞，转输给同品系健康动物（空白对照动物），使健康动物发病。

（1）取发病动物淋巴结进行细胞培养，并做CD4细胞筛选。

（2）测定细胞对抗原的特异性反应，PKH2-GL标记细胞。

（3）给健康动物注射细胞，10天后观察症状，对动物脑组织和脊髓中单个核细胞分离，做细胞表型分析。

临床表现：
小鼠在诱导12±3d急性起病，并在16±2d内达到高峰，持续时间不等，之后逐渐恢复至尾部轻度无力或者僵硬，小鼠发病的严重度评分为3.2±0.6分。

神经功能评分：
自免疫诱导当日起开始测量小鼠的体重，免疫后32天，采用双盲法进行神经功能评分，具体评分标准如下：
0级，无临床表现；
1级，精神委靡，尾部无力；
2级，行走步态异常，双后肢无力；
3级，双后肢瘫痪；
4级，双后肢瘫痪伴一侧或者两侧前肢瘫痪；
5级，濒死或者死亡。复发的定义是指在首次发病恢复后再次发作的临床评分高于以前，或者同一评分持续3d以上。

模型特点：

动物品系不同，其敏感性有很大不同。鼠的AE模型在临床表现、病理、免疫、生化改变方面都与人类脱髓鞘疾病详细，应用广泛。

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