肝纤维化/肝硬化动物模型_江苏艾菱菲生物科技有限公司

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肝纤维化/肝硬化动物模型

肝纤维化

主要是一种病理学概念，指肝组织内细胞外基质(ECM)成分过度增生与异常沉积，导致肝脏结构或/和功能异常的病理变化。其本质是肝脏对于慢性损伤的一种修复反应，类似于人体皮肤受到损伤后的疤痕形成。

目前国内外在诱导肝纤维化模型形成的方法中，常用的肝纤维化动物模型包括si氯化碳（CCL4）诱导模型、er甲基亚硝胺（NDMA）诱导模型、胆管结扎诱导肝纤维化模型、饮食诱导模型等。

但最经典、最常用的方法是应用CCl4诱导下建立肝纤维化动物模型。

一、实验动物的选择

由于雌性大鼠对CCl4易产生耐受而成模率低，所以CCl4复制肝纤维化模型通常以小鼠或雄性大鼠作为选用对象，染毒途径主要为灌胃、腹腔注射或皮下注射。

二、大鼠造模方法

01 配制CCl4溶液，CCl4与橄榄油按照体积比1:4混匀，备用。

02 按大鼠体重0.5μl/g CCl4（2.5μlCCl4橄榄油溶液）腹腔注射，每周2次，持续6周。空白对照组只注射橄榄油2.5μl/g。

03 在连续给CCl42周后，可随机抽取对照组和造模组鼠各3只，检测ALT、AST、TBL以及切片等是否造模成功。

HE染色检测肝纤维化模型

大鼠肝纤维化病理切片

注: A: 正常组: B: 肝纤维化模型组。

正常细肝组织内肝细胞胞浆主富、红染，无明显脂肪变性等，肝细胞围绕中央静脉呈放射状排列。

模型组肝细胞明显脂肪变性，部分肝细胞水样变性，小叶结构不清，纤维组织明易增生，形成纤维间隔，分割肝小叶，纤维间隔内有散在炎症细胞浸润。

04 若模型成功，即可进行药物评价，继续处理4周后，即可处死大鼠，检测肝纤维化相关的Marker，评价药物效果。

大鼠肝脏大体标本观察

注: A: 正常组; B: 肝纤维化模型组

正常组肝脏表面呈鲜红色，表面光滑柔软，无结节和颗粒，肝缘锐利，形态与大小均正常。

肝纤维化模型组肝脏表明颜色较正常组织暗淡，质地稍韧，表面有颗粒改变，肝缘较正常组变钝，被膜肿胀。

模型特点：注射CCl4后，模型动物活动逐渐减少，精神萎靡，毛发蓬乱无光泽，进食量减少，体重增长速度减慢。

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三、小鼠造模方法

01 成年雄性小鼠，按 5 ml/kg 体重的剂量皮下注射20%CCL茶油溶液，每5天一次，连续3个月。对照组小鼠腹腔注射等量等次的橄榄油溶剂。

02 正常饮食饲养，观察动物活动、精神状况和饮食情况，每周称重一次。

03 实验结束前，禁食6小时，然后处死小鼠取肝脏用于病理及相关蛋白分析。

注意事项

1、模型小鼠在造模30d时，半数动物肝脏出现少量，纤维组织增生；

2、60d时，多数动物呈现少量至中等纤维组织增生;

3、90d时，全部动物呈中等至大量纤维组织增生，肝脏释脯氨酸含量亦随造模时间延长而逐渐升高；造模60d 时升高，至90d时升高更显著。

4、肝脏丙二醛含量和血清丙氨酸转氨酶在造模各阶段均明显升高，至造模 90d时，血浆白蛋白比例明显下降。

肝脏组织纤维化相关蛋白表达情况

肝硬化动物模型

CCl4作为使用最早、最广泛的肝纤维化诱导剂，其诱导慢性肝损伤的机理是直接损害肝细胞，破坏细胞的各种成分，造成肝细胞的脂肪变性与坏死，乙醇为酶诱导剂，损害线粒体，增加肝细胞氧耗量，还可增强CCl4对肝细胞的毒性作用，两者同时作用可促进肝硬化的形成。

因此，CCl4 模型也常用于探索药物性肝硬化发病机理，评估抗肝硬化药物的药效等实验研究。CCl4诱导肝硬化动物模型具有操作简便、材料价廉以及病变典型等特点，可以通过消化道、腹腔注射或皮下注射等方式制作肝硬化动物模型。

CCL4诱发肝硬化动物模型

一、实验动物的选择

成年雄性大鼠

二、造模方法

1、经其腹腔注射30%CCl4石蜡油溶液2ml/kg体重，2次/周，连续7周。

2、或皮下注射40%CCl4大豆油溶液3ml/kg体重，首剂5ml/kg体重，每3d一次，共14次，期间，在实验开始后前2周，饲以80%玉米面和20%猪油混合饲料，2周后在饲料中混入0.5%胆固醇，以30%乙醇作为唯yi饮品，连续42d。

3、或皮下注射50%CCl4大豆油溶液3ml/kg体重，首剂5ml/kg体重，每4d一次，第5次起，改为肌肉注射，共15次，期间饮10%乙醇替代饮水，食常规颗粒饲料，连续60d。

4、或皮下注射60%CCl4矿物油溶液3-5ml/kg体重，每4d一次，共15次，其中头4次剂量为5ml/kg体重，5-11次为3ml/kg体重，12-15次为5ml/kg体重，同时以10%乙醇作为唯yi饮用水，连续66d。

肝脏湿重变化

图A为对照组大鼠肝脏大体图像；

图B-D分别为CCl4造模4周、8周、12周大鼠肝脏大体图像；

CCl4组造模初期，主要表现为肝叶变形、粘连。造模12周时，随着纤维化程度加重，肝脏表面呈颗粒状，肝脏湿重较对照组明显增加(P<0.05)。

模型特点：模型制作观察过程中，模型动物精神萎靡、食欲不振、嗜睡、易激怒，时见互相间撕咬和攻击。

肝硬化（hepatic cirrhosis，HC）是各种慢性肝病发展的晚期阶段，发病初期表现为轻度乏力、腹胀等症状，后期以肝功能损害和门脉高压为主，随病情进一步发展可出现消化道出血、肝性脑病等严重并发症，死亡率极高。

然而，目前研究尚未完全明确肝硬化的发病机制。因此，建立肝硬化动物模型，并通过动物实验研究肝硬化的发病机制，探索肝硬化的防治手段是我们需要重视的问题。

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