免疫组化一抗二抗选择“不二”乎！

发布时间：

2022-07-16 00:00

　　微生物实验室主要是用于微生物学、生物医学、生物化学、动物实验、遗传因子重组以及生物制品等研究的实验室。接下来本文就来介绍一下微生物实验室设计规范标准及要求。

　　一、微生物实验室设计规划标准

　　微生物实验室每个空间都需要独立起来，各个空间根据工作内容不同进行平面设计规划。入口处设置集中式更间，培养室根据培养条件和种类不同可设置多间(如霉菌培养室、细菌培养室、固体培养室、液体培养室等)。

　　1、洁净实验室：安排在实验室的靠边角落处，用密封门控制人员的进出，把有洁净要求的房间设置在人员干扰较少的地方，把辅助房间设置在外部。考虑微生物实验操作流程，方便人流与物流的份额里。为控制人员的出入(人流)，只设有一个密封门进入微生物实验室主洁净区，操作人员进入走廊然后进入准备间，并从准备间分别经过一更、二更、缓冲进入操作区。物流则由传递窗实现。排风口装有高效过滤器，送风口装有高效过滤静压箱，室内送排风曹勇上送下排方式，室内排风单侧布置，不得有障碍。余压阀自动调节室内压力，保持正压洁净状态。

　　2、洗涤室：洗涤室房间的尺寸根据日常工作量决定，一般不小于一个单间，洗涤室的位置靠近培养室，给排水设施完善，洗涤台面须耐热耐酸，室内配器皿柜，滴水架，干燥架，边台等，地面应有良好的排水坡度和地漏。

　　3、准备室：设实验台、试剂柜等要绝缘、耐热、实验台要耐水耐腐蚀：设置上下水装置，涉及粉末，筛分等操作，需配置相应的设备。局部排风，设排风柜。

　　4、培养室：主要配置各种培养箱、摇床，要求温度较恒定，有足够的电力供应。

　　二、微生物实验室设计规划要求

　　1、设计微生物实验室要合理规划出各个科室，一般包括准备室、微生物培养室、器械消毒及清洗室、纯水室、检测室、菌种室、储藏室等。

　　2、各个科室之间应为独立区域，并且设置隔离门，在比较重要的实验室中要设立好缓冲区，进入实验室人员可在缓冲区二次清洁及更换衣物。

　　3、实验室(含缓冲间)围护结构内表面必须光滑耐腐蚀、防水，以易于消毒清洁。所有缝隙必须加以可靠密封。实验室内所有的门均可自动关闭。

　　4、除观察窗外，不得设置任何窗户。观察窗必须为密封结构，所用玻璃为不碎玻璃。地面应无渗漏，光洁但不滑。不得使用地砖和水磨石等有缝隙地面。

　　5、通风空调系统为直排系统，不得采用部分回风系统。

　　6、实验室家具要牢固可靠。为易于清洁，各种家具和设备之间应保持一定间隙。应有专门放置生物废弃物容器的台(架)。家具和设备的边角和突出部位应光滑、无毛刺，以圆弧形为宜。

　　以上就是关于微生物实验室设计规范标准及要求的相关介绍，供大家参考。

　　》》需要进行微生物实验室设计规划、微生

　　做过病理实验的人都知道，实验看似容易，但真想把它做好，还是需要花上很长一段时间去积累和摸索经验。本次中洪君(ID：boyuan6668)结合多年来做免疫组化的经验与大家分享如何选择一抗、二抗。

　　一抗的选择要点和技巧

　　1、单克隆和多克隆抗体的选择

　　由一种克隆产生的特异性抗体叫做单克隆抗体。单克隆抗体能目标明确地与单一的特异抗原决定簇结合，就像导弹精确地命中目标一样。另一方面，即使是同一个抗原决定簇，在机体内也可以由好几种克隆来产生抗体，形成好几种单克隆抗体混杂物，称为多克隆抗体。在抗原抗体反应中，一般单克隆抗体特异性强，但亲和力相对小，检测抗原灵敏度相对就低;而多克隆抗体特异性稍弱，但抗体的亲和力强，灵敏度高，但易出现非特异性染色(可以通过封闭等避免)。

　　2、应用范围的选择

　　有的一抗只能用于 WB ( Western blotting)或免疫组化、免疫荧光、免疫沉淀等;甚至表明石蜡切片或冰冻切片。

　　3、种属反应性的选择

　　这一点很重要，表明这种抗体可能存在种属差异，且这种抗体适合检测哪种种属动物体内的抗原。

　　4、种属来源

　　一般兔来源的多是多克隆;而小鼠来源的多是单克隆，但也有另外。根据此来源来选择相应的二抗。

　　5、生产厂家的选择

　　如santa Cruz公司抗体一般1ml，价格2100元左右;而chemicon公司一抗一般 100μl，价格2800元左右。这两个厂家的同一种抗体，它的实际效价稳定是不同的，我一般用后者抗体做免疫组化效果较好，而前者做 WB 效果还可以。

　　二抗的原理及特点

　　1、SABC法

　　原理：SABC法是利用链酶亲和素(Streptavidin)与生物素(Biotin)特有的高度亲和力这一生物学性质，先将生物素与辣根过氧化物酶(HRP)结合，形成生物素化HRP，然后与链酶亲和素按一定比例混合，形成SABC复合物。用生物素化二抗与第一抗体结合，再与SABC复合物联结形成抗原～抗体～生物素化二抗～ SABC复合物。最后用底物显色剂显色。

　　特点：该法具有灵敏度高以及低背景染色等特点。

　　2、SP法

　　原理：根据生物素(Biotin) 与链霉亲和素(Streptavidin)具有强结合力的原理设计。在一抗(兔源与鼠源)与相应的靶抗原结合后，生物素化标记的抗多价二抗与一抗特异结合;二抗上标记的生物素与标记了辣根过氧化物酶(HRP)的链霉亲和素结合，形成抗原～特异性一抗～生物素化的二抗～HRP 标记的链霉亲和素复合物。

　　特点：该法孵育时间短(通常为10min)，灵敏度高以及低背景染色等特点。

　　3. Polymer酶标二抗法

　　原理：该法采用一段多聚氨基酸聚合物做为载体链，将该多聚物与二抗结合，然后可再标记上多个HRP/AP酶分子，所以同样具有很高的信号放大作用。

　　特点：灵敏度高;操作步骤简单;无需进行内源性的生物素封闭。

　　4. 直接酶标二抗法

　　该法是将HRP/AP酶分子直接标记于二抗上。因此需要普通的酶标二抗即可完成。实验简单，成本低，但是因为没有信号放大作用，所以对很多表达丰度不是很高的抗原就可能检测不到。

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