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干货 | 为什么别人的切片染色做的那么好看？切片染色技巧分享

发布时间：

2022-12-12 16:26

切片染色作为最常做的病理分析，想必小伙伴们都做过。但操作有好有坏，同样是做切片染色，有的小伙伴做出来的结果非常漂亮，有的小伙伴却发现自己总也做不好。

今天小编就给大家分享一些切片染色的小技巧。

石蜡切片

1．取材

（1）取材要快，时间久了组织细胞的成分、结构等会发生变化。

（2）取材时尽可能减少对取材组织块的损伤。

2．固定

（1）固定液现用现配，有的混合固定液之间会发生氧化还原作用，配置时间过早会失去固定效果。配好后放至阴凉处，避免阳光直射。

（2）固定液用量必须充足（多数为组织块的20~30倍），水分多的组织块中间应更换1-2次新液。

（3）固定完毕后，保存于严密紧塞或加盖的容器里，同时在容器内外做好标记。

（4）不同的组织有不同的固定液，例如眼球有专门的眼球固定液。固定液会影响后续的切片染色。

3.脱水

（1）脱水必须在有盖的玻璃瓶中进行。

（2）更换高浓度的脱水剂时，最好不要移动组织块。

（3）每级停留时间不宜太长，严格控制脱水时间。

（4）如果脱水组织块需要过夜，可将组织块停留在70%浓度的乙醇溶液中。

（5）脱水必须彻底，否则不易透明。

4．透明

（1）使用透明剂时，要随时盖紧盖子，以免空气中的水分进入。

（2）更换每级透明剂动作要快速，避免吸收湿气。

（3）在透明过程中，如果材料周围出现白色雾状，说明材料中的水未被脱净，应重新脱水，然后再透明。

5．透蜡

（1）尽量保持在较低温度中进行，以石蜡不凝固为度；

（2）透蜡温度要恒定，不可忽高忽低；

（3）操作要迅速，尽量在最短的时间内完成石蜡透入过程，以免引起组织变硬、变脆、收缩等。

6.切片

（1）在每次操作切片刀和标本，或更换标本前一定要锁定手轮，并用护刀罩将刀刃遮住。

（2）将基体上的刀架尽可能靠近标本,调整标本的表面位置，使之与刀刃尽可能平行。

（3）在切片时，匀速转动手轮。当切到比较硬的标本时，放慢手轮转动速度。

（4）在操作切片刀和标本前，或调换标本和切片刀前，或是在休息时，应锁定手轮，用护刀罩盖住刀片边缘！

冰冻切片

1. 包埋剂用量要适宜，过多过少都会影响组织的冷冻质量。

2. 现将少量胶挤在托架上预冷冻，约30秒钟左右，胶水凝固再放置组织。放置时在组织周围再加一些胶去冷冻。

3. 冷冻的温度要根据不同的组织调整，温度过低过高都会对组织块的后续切片产生影响。

4. 载玻片室温存放即可，不需要冷冻存放。

5. 切片时保持刀片锋利。当发现切片质量开始下降，建议更换刀片。同时选用最舒服、放纵的姿势，有利于控制双手。

6. 可以使用刷子帮助取下切片。

7. 切片时持续均匀地转动切片机，比切一片停一下切出来的效果更好。

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染色多种多样，借助于机器染色的效果会更好一些。下面总结几种常见的染色步骤

HE染色步骤

1. 切片入二甲苯I脱蜡 5 min

2. 二甲苯II脱蜡 5 min

3. 二甲苯III脱蜡 5 min

4. 无水乙醇I 1 min

5. 无水乙醇II 1 min

6. 95%乙醇 1min

7. 85%乙醇 1min

8. 自来水冲洗 1min

9. 苏木精染液 5~10min

10. 自来水冲洗适度

11. 1%盐酸酒精分化数秒

12. 自来水冲洗适度

13. 伊红染液 1~3min

14. 自来水冲洗适度

15. 95%乙醇I 10s

16. 95%乙醇II 10s

17. 无水乙醇I 30s

18. 无水乙醇II 30s

19. 无水乙醇III 1min

20. 二甲苯透明I 1min

21. 二甲苯透明II 1min

22. 二甲苯透明III 1min

23. 树脂封片

天狼星红染色

1. 石蜡切片脱蜡至水

2. 天狼星红染液1h

3. 流水冲洗数秒

4. 0.5%醋酸分化30 s

5. 无水乙醇 30 s *3

6. 二甲苯1 min*3

PAS染色

1. 石蜡切片脱蜡至水

2. 过碘酸氧化20 min；蒸馏水3 min

3. Schiff染液40 min；蒸馏水1 min

4. 苏木素5 min；蒸馏水2 min

5. 盐酸酒精1s；蒸馏水2 min

6. 蓝化液 5 s

7. 无水乙醇 30 s

8. 二甲苯3 min

MASSON染色

1. 石蜡切片脱蜡至水

2. 苏木素 5 min；盐酸酒精10 s

3. 蓝化液 10 s；蒸馏水2 min

4. 丽春红5 min；0.2%冰醋酸1 min

5. 1%磷钼酸1min；苯胺蓝 1 min

6. 0.2%冰醋酸1min

7. 无水乙醇 30 s

8. 二甲苯3 min

效果展示

小鼠组织HE染色效果

肿瘤组织CD71单标免疫荧光

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主办 | 艾菱菲市场营销部

监制 | 时时

总编 | 柠檬

编审 | 小燕子

编辑 | 柠檬

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