许多小伙伴对于实验动物样品保存、寄送方法都不太了解。今天小编就集中地为大家讲解实验动物样品如何科学有效的保存和寄送。
为了防止组织样本因离体时间太久细胞发生变化,样本离体后最好在20min以内固定,以方便后续检测。注意送检的样本必须是固定好、且固定时间超过2天。不同的组织样本、不同的检测目的,其固定方法也不相同。
a、组织离体清洗后应立即固定,固定液一般10%中性福尔马林或4%多聚甲醛(尽量不要用酒精固定),室温保存。
b、固定用的器皿必须根据样本体积而定,组织固定液的体积应是样本体积的10-15倍 ,且不宜用V型底,细长或小管固定。大组织标本应切开固定,以免中间部分自容腐败,如有特殊要求,请自行根据实验要求选择其他处理方式。
c、如果是冰冻切片标本,必须新鲜(处理步骤:组织离体后用OCT包埋,-80℃保存。送检过程中必须有足够多干冰或冰袋)。
d、特殊的组织需要用特定的固定液,避免样本发生变化,影响后续检测,具体要求参见表格1.
e、胃、肠道的内容物处理需特别注意:切忌不能用挤的方式 ,会破坏黏膜 ,可以用针打10%中性福尔马林或者4%多聚甲醛到胃和盲肠 里面去固定一会,半个小时切开用10%氯化钠溶液清洗 ,然后再固定。
f、对于皮肤、肺等比较轻,容易漂浮在固定液上面的组织:可以选择在固定液上面放沾湿的棉花团压住 ,避免组织漂浮在固定液上导致固定不充分。或者再完整的肺组织离体后,往主支气管中灌固定液冲洗整个肺部,并使肺部充盈 ,然后把充盈后的整肺放入固定液中送检。
a、贴壁细胞:细胞消化后,离心,倒掉培养液保留细胞沉淀,用PBS洗一遍,离心倒掉液体保留细胞沉淀后 ,加固定液(10%中性福尔马林或4%多聚甲醛)重悬,常温送检。
b、悬浮细胞:离心,倒掉培养液保留细胞沉淀,用PBS洗一遍,离心倒掉液体保留细胞沉淀后 ,加固定液 (10%中性福尔马 林或4%多聚甲醛)重悬,常温送检。
a、取样组织2mmX2mm大小,尽量薄。如来不及修整组织大小可先于电镜固定液内固定半小时左右待组织变硬以后再修整组织进行后固定。超出此范围后组织会无法完全固定,后续实验无法完成,务必请重视此过程。
b、取材时尽量精确到需要观察的目的部位(如观察肾小球取肾皮质;观察胰岛取胰岛丰富的胰尾;皮肤,肠胃等在固定液中易打卷的组织可将组织粘在滤纸上进行固定)。
c、注意避免镊子挤压等机械损伤,刀片要锋利避免挫伤组织。
d、织取下后立即投入电镜固定液内室温固定2h,再转移至4℃保存,4℃冰袋运输,在保存和运输过程中固定液切勿冷冻结冰。4℃时样本可保存1个月左右。
根据不同的检测指标,选择不同的血液抗凝剂。都为-80℃保存。
ELISA:建议优先选择血清,其次选择肝素或EDTA抗凝血浆;
组织样本离体清洗后液氮速冻5min,-80℃保存。细胞沉淀后-80℃保存。
首先注意寄送过来的样本为固定好、且按照样本保存要求执行的。
a、固定液固定的组织样本、组织蜡块、白片及其他非荧光染色玻片为常温寄送。玻片在包装时注意放入纸巾或气泡膜防震。
b、4℃保存的样本在寄送时选择冰袋运输,在保存和运输过程中固定液切勿冷冻结冰。
c、荧光染色玻片送检:置于载玻片盒中低温避光送检,可在里面放入纸巾或气泡膜防震 ,外面包一层锡纸避光,放足够冰块或干冰低温送检。
d、冰冻切片样本送检过程中必须有足够多干冰,选用保温泡沫箱进行包装。
e、送检的标本应具有物种、标本类型、标本离体时间、固定时间、固定类型、组织部位等信息,信息必须与送检纸质信息一致并清晰,并确定组织是否固定完全,如果难以判断,请与病理实验室工作人员联系咨询。
f、体积过小过薄的组织样本易丢失,不建议送检 (如厚度<1mm的样本)。
小编为大家整理了表格方便保存(表2)

如需要做组学相关检测,则需要注意样品的处理与送样量,这里小编整理成了表格方便大家记录。(见表3-4)

表3

表4
以上就是本期的全部内容,是否对你产生了帮助呢?
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投稿 | 亚伦
编审 | 小燕子
编辑 | 柠檬