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疾病模型|胸腔挤压法冠状动脉左前降支(LDA)结扎建立小鼠心肌缺血模型

发布时间：

2024-04-16 10:21

导语：心肌缺血( Myocardial Ischemia，MI) 是指心脏血液灌注减少，导致心脏供氧减少，心肌能量代谢不正常，不能支持心脏正常工作的一种病理状态。随着我国老龄化社会的形成，心脑血管疾患逐渐成为严重影响人们生命健康的最主要疾病。建立合适的心梗动物模型对研究 MI 的发病机理及防治措施显得尤为重要。

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目前建立心肌缺血动物模型的方法有多种，包括：冠脉结扎法、药物法、球囊堵闭法、栓塞法以及血栓形成法等。其中冠状动脉结扎法操作简单、血管阻塞明确，比较符合心梗发生的病理过程，能较好的实现临床转化。

而胸腔挤压法冠状动脉左前降支(LDA)结扎建立小鼠心肌缺血模型，通过小切口人工暴露，不用插呼吸机，因速度快、创伤小、手术死亡率低等优势被广泛使用。

小鼠MI造模方法

01 小鼠麻醉，仰卧保定；

02 距胸骨左缘皮肤处做纵向切口，切口处行垂直外翻褥式缝合预留缝线；

03 逐层钝性分离胸壁肌肉，从第 3 或第4 肋间隙快速进入胸腔，用止血钳撑开肋间隙，配合心脏跳动左手轻轻挤压使心脏从孔隙中弹出。

04 用7-0带线缝合针穿过左冠状动脉前降支（LAD）将其结扎，松紧适宜，控制进针深度(以隐约可见细针为宜)和行针宽度(2mm左右)。

05 由于不借助通气装置，要求开胸时间不要超过30s，结扎操作尽量控制在 10s 左右完成。结扎完成后轻柔地将心脏送回胸腔，挤压胸腔排出空气同时收紧结扎切口处预留缝线完成手术。

06 术中逐步调整麻药浓度至零，取下面罩后将小鼠置于恒温垫上约3~5min 即可复苏。

图片来源艾菱菲生物

模型特点：

以往传统的开胸造模需使用呼吸机并进行气管插管，易造成小鼠气管喉头水肿，且施术时间久、创伤大，小鼠术后易引起感染，导致死亡率增加; 而胸腔挤压法冠状动脉左前降支(LDA)结扎建立小鼠心肌缺血模型手术过程创伤小、耗时少、高效、可短期大批量完成，尽可能保证造模的均一性，也最大限度减少了人为因素对实验结果的干扰。 TTC 染色

常规 TTC 染色，可观察到模型组梗死区呈白色，非梗死区呈红色，从结扎位置到心尖，白色梗死区所占面积百分比逐渐增加，靠近心尖的心脏切片几乎全部变白。

图片来源艾菱菲生物

Evans Blue + TTC 双染色

Evans Blue染色瞬间；图片来源艾菱菲生物

图片来源艾菱菲生物

Evans Blue + TTC 双染色可观察到模型组非缺血区呈蓝色，梗死区为白色，而危险区不会被染色，呈现原有的心肌颜色为红色。

Evans Blue + TTC 双染色法是一种组合技术，可以同时观察心肌细胞完整性和代谢活动，主要用于评估动物心脏缺血再灌注损伤模型中危险区和梗死区面积的相对大小，将心脏损伤后受损程度可视化，从而进行心肌梗死区域的定位和分析。

病理染色

空白组，组织结构正常，无明显的炎性细胞浸润，模型组梗死部位可见蓝色的胶原沉积，纤维化显著。

图片来源艾菱菲生物

注意事项

大鼠心肌缺血MI模型构建和小鼠的方法相似，需根据大鼠的体重选择合适的缝线。除此之外，在手术中还需要注意这些细节：

01 尽快完成冠脉结扎并闭合胸壁，降低长时间暴露胸腔可能导致心律失常、气胸等致死风险。

02 心脏血管细小，侧枝循环丰富且走行不易观察，因此要求实验者操作精确，既要保证能够引起足够面积的心肌梗死，又要避免梗死面积过大而导致死亡，尽量在同一高度结扎形成较为一致的模型

03 心室壁较薄，操作者需要严格控制穿刺深度，避免穿刺过深直接刺破室壁造成大出血。

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心肌缺血再灌注损伤（myocardial ischemia reperfusion injury，MIRI）是指由于各种原因导致心肌细胞出现缺血性损伤，以及在恢复血液供应后心肌的超微结构、功能、代谢及生理方面损伤进一步加重的现象。

心肌缺血再灌注损伤与yong久性心肌缺血造模方法相比，yong久性心肌缺血使用7-0结扎线打死结，yong久性结扎左前降支（LAD），造成心肌yong久性梗死；心肌缺血再灌注损伤模型采用7-0缝合线打活结，或使用结扎棒结扎，在一定缺血时间后，松开活结，去掉结扎棒恢复血流，以对缺血的心肌组织重新进行血流灌注。

参考文献：

[1] 丁怡铭,高杰,邢元铭,等.小鼠心肌梗死模型的建立及系统性评价[J].中国实验动物学报,2022,30(07):873-879.

江苏艾菱菲生物科技有限公司（Jiangsu Aniphe Biolaboratory Inc.）成立于2018年，致力于成为生物医药发展新时代国际知名的新药临床前药效学评价企业。艾菱菲生物建成了集动物代繁代养、疾病模型构建、动物实验于一体的，涵盖肿瘤、神经、代谢等领域的综合性SPF实验动物中心。中心含大小鼠笼位5000笼以上凭借专业的技术团队以及丰富的动物资源艾菱菲生物可提供多种疾病动物模型，如大小鼠脑缺血再灌注模型MACO/R、心肌梗死/心肌缺血MI、主动脉弓缩窄TAC、人源组织异种移植肿瘤模型PDX、细胞移植肿瘤模型CDX、脊髓损伤模型SCI、癫痫动物模型Epilepsy、阿尔兹海默病 AD模型等，并针对相关疾病模型进行药理药效等服务，欢迎广大客户前来咨询！

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